猪β干扰素成熟蛋白编码基因的克隆及其在大肠埃希菌中的表达与纯化

被引：4

作者：

吴阳 ^{[1
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李玲玲 ^{[2
]}

李玉林 ^{[3
]}

李晨阳 ^{[1
]}

王岁楼 ^{[1
]}

机构：

[1] 郑州轻工业学院食品与生物工程学院

[2] 河南师范大学生命科学学院

[3] 河南省生物工程技术研究中心

来源：

动物医学进展 | 2006年 / 12期

关键词：

猪β干扰素成熟蛋白; 基因克隆; 原核表达; 亲和纯化;

D O I：

10.16437/j.cnki.1007-5038.2006.12.018

中图分类号：

S852.4 [家畜免疫学];

学科分类号：

090604 [动物药学];

摘要：

从猪肝脏中提取基因组DNA,利用PCR法直接扩增了猪β干扰素成熟蛋白编码基因。将PCR产物亚克隆至pGEM-7Zf(+)载体,转化入大肠埃希菌TG1,筛选出阳性菌株后进行测序。序列分析结果表明,克隆片段含编码猪β干扰素成熟蛋白质的495个核苷酸,与GenBank上(登录号:S41178)的序列同源性达到100%。在此基础上,构建了猪β干扰素原核表达载体pQE30/poIFN-β并转化入大肠埃希菌M15。该工程菌在37℃经0.03mmol/LIPTG诱导4h后,进行SDS-PAGE电泳,结果在分子质量约20ku的位置出现了明显的目的蛋白条带,表达产物主要以包涵体形式存在。经凝胶分析软件Bandscan分析,表达产物约占菌体总蛋白的18%。包涵体用6mol/L盐酸胍溶解,经过Ni-NTA亲和层析法纯化,获得了纯度较高的目的蛋白,为下一步对猪β干扰素进行复性及活性研究打下了基础。

引用

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页数：4

共 4 条

[1]

猪β干扰素在毕赤酵母中的分泌表达及其对伪狂犬病毒的抑制作用 [J].