人HIF-1α基因重组腺病毒的构建与鉴定

被引：4

作者：

蒋春华 ^{[1
]}

高钰琪 ^{[1
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黄庆愿 ^{[1
]}

黄缄 ^{[1
]}

贺伟峰 ^{[2
]}

段小军 ^{[3
]}

机构：

[1] 第三军医大学高原军事医学系病理生理学与高原生理学教研室,全军高原医学重点实验室

[2] 第三军医大学西南医院全军烧伤研究所,创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室

[3] 第三军医大学西南医院骨关节中心,全军矫形外科中心

来源：

第三军医大学学报 | 2006年 / 20期

关键词：

腺病毒; HIF-1α基因; 同源重组;

D O I：

暂无

中图分类号：

Q78 [基因工程（遗传工程）];

学科分类号：

071007 [遗传学];

摘要：

目的构建人缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)基因的重组腺病毒载体,并观察其对HepG2细胞的转染情况。方法采用基因工程技术,经过亚克隆将人HIF-1α基因片段克隆至穿梭质粒pAdTrack-CMV上,利用pAdEasy系统进行细菌内同源重组后,经脂质体转染HEK293细胞,进行重组腺病毒的包装、扩增。采用PCR方法对重组腺病毒进行鉴定,利用穿梭质粒中带有绿色荧光蛋白GFP报告基因,进行病毒滴度的测定和对HepG2细胞感染效率的监测。结果酶切鉴定及PCR结果证明重组腺病毒载体成功,人HIF-1α重组腺病毒滴度达1.15×1010pfu/ml,阴性对照腺病毒的滴度为8×1010pfu/ml,并对HepG2细胞具有很强的感染力。结论应用细菌内同源重组法成功构建了含人HIF-1α基因的重组腺病毒载体。

引用

页码：2040 / 2043

页数：4

共 4 条

[1]

分子克隆实验指南.[M].(美)J.萨姆布鲁克(JosephSambrook);(美)D.W.拉塞尔(DavidW.Russell)著;黄培堂等译;.科学出版社.2002,

[2]

Transcriptional coregulators of the nuclear receptor superfamily: coactivators and corepressors [J].