夏枯草ISSR分子标记技术的建立与体系优化

目的建立并优化夏枯草ISSR-PCR反应体系和扩增程序,为探讨夏枯草种质间遗传多样性奠定基础。方法采用单因子试验和正交设计方法,研究Mg2+、dNTP、引物、TaqDNA聚合酶、模板DNA、退火温度及循环次数对PCR扩增的影响。结果夏枯草ISSR-PCR的最佳反应体系为:在20μL的反应体系中含模板DNA30ng,Mg2+2.2mmol/L、dNTP175μmol/L、引物0.75μmol/L、TaqDNA聚合酶1.0U。在此基础上,从92条引物中筛选出18条扩增稳定、多态性丰富的ISSR引物,并通过梯度PCR试验,确定引物最佳退火温度。结论采用单因子试验和正交设计方法可以快速建立ISSR-PCR反应体系,经过24份夏枯草种质检验,证明该体系稳定可靠,可用于夏枯草遗传分析。