银杏叶提取物对破骨细胞分化和骨吸收的作用及其机制

目的:探讨不同浓度银杏叶提取物（GBE）对破骨胞分化和骨吸收的作用,并阐明其作用机制。方法:体外培养RAW264.7细胞,采用核因子κB受体活化因子配体（RANKL）和不同浓度GBE处理细胞,分为空白对照组(0μg·L-1 RANKL)、RANKL组(100μg·L-1 RANKL)和RANKL+75 mg·L-1 GBE和RANKL+150mg·L-1 GBE组。抗酒石酸酸性染色（TRAP）法观察各组破骨细胞的形态及数量,骨吸收陷窝面积评估GBE对破骨细胞骨吸收能力的影响,流式细胞术检测细胞凋亡率及细胞周期,RT-PCR法检测RAW264.7细胞中破骨细胞相关基因活化T细胞核因子c1（NFATc1）、树突状细胞特异性跨膜蛋白（DCSTAMP）、组织蛋白酶K（Cathepsin K）、基质金属蛋白酶9（MMP-9）、B淋巴细胞瘤2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、P27和细胞周期蛋白D1（Cyclin-D1）的表达水平。结果:与空白对照组比较,RANKL组破骨细胞的数量明显增加（P<0.05）;与RANKL组比较,RANKL+75mg·L-1 GBE和RANKL+150mg·L-1GBE组破骨细胞数量明显降低（P<0.05）。与空白对照组比较,RANKL组骨片中骨吸收陷窝面积明显升高（P<0.05）;与RANKL组比较,RANKL+75mg·L-1 GBE和RANKL+150mg·L-1 GBE组骨片中骨吸收陷窝面积明显降低（P<0.05）。与空白对照组比较,75和150 mg·L-1 GBE组RAW264.7细胞凋亡率升高（P<0.05）,RAW264.7细胞中Bcl-2基因表达水平明显降低（P<0.05）,Bax基因表达水平明显升高（P<0.05）。与RANKL组比较,RANKL+75 mg·L-1 GBE和RANKL+150 mg·L-1 GBE组RAW264.7细胞G0-G1期阻滞明显缩短（P<0.05）;RAW264.7细胞中P27基因表达水平明显降低（P<0.05）,Cyclin-D1基因表达水平明显升高（P<0.05）。与空白对照组比较,RANKL组RAW264.7细胞中破骨细胞相关基因NFATc1、DC-STAMP、Cathepsin K和MMP-9表达水平明显升高（P<0.05）;与RANKL组比较,RANKL+75mg·L-1 GBE和RANKL+150 mg·L-1 GBE组RAW264.7细胞中破骨细胞相关基因NFATc1、DCSTAMP、Cathepsin K和MMP-9表达水平明显降低（P<0.05）。结论:GBE可抑制破骨细胞分化和骨吸收能力,其机制可能与促进RAW264.7细胞凋亡、缩短RANKL诱导的RAW264.7细胞的G0-G1期有关。