碱性果胶裂解酶基因pelA在E.coli中的表达和酶学性质研究

被引：2

作者：

翟超

曹军卫

机构：

[1] 武汉大学生命科学学院

[2] 武汉大学生命科学学院湖北武汉

[3] 湖北武汉

来源：

武汉大学学报(理学版) | 2001年 / 04期

关键词：

碱性果胶裂解酶; 嗜碱芽孢杆菌; PCR; 表达;

D O I：

10.14188/j.1671-8836.2001.04.023

中图分类号：

Q785 [转化及克隆];

学科分类号：

071007 ; 0836 ; 090102 ;

摘要：

根据核苷酸序列分析结果设计引物 ,通过 PCR的方法 ,在嗜碱芽孢杆菌 NTT3 3的总 DNA和 p13 5 0中分别扩增到预计大小的片段 ,证明 p13 5 0中的外源 DNA片段来自于嗜碱芽孢杆菌 NTT3 3 .同时也获得了含有pel A完整 ORF的 DNA片段 .经计算 ,该基因表达的成熟蛋白质的分子量为 3 4 .76× 10 3.构建表达载体 p BV2 2 0 -pel,在 E.coli DH5α中进行表达 .SDS- PAGE检测发现 ,表达的蛋白质分子的大小约为 3 5× 10 3,与预测的相符 .初步研究其酶学性质发现 ,该酶在 p H 9.0～ p H10 .0 ,4 5°C的条件下有较高的活性 ,而且必需 Ca2 + 参与反应 .

引用

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