重型再生障碍性贫血患者CD8+HLA—DR+效应T细胞调控因素的研究

目的体外研究重型再生障碍性贫血（SAA）患者骨髓CD8+HLA-DR+T细胞的调控因素,进一步探讨该群细胞在SAA免疫发病中的地位。方法选取2011年7月至2012年3月收治的13例初治SAA患者。免疫磁珠分选SAA患者骨髓CD8+HLA-DR+ T细胞后分为3组:白细胞介素2（IL-2）组（加入IL-2终浓度分别为0、0.1、1、10、100、1000 U/L）;环孢素A（CsA）组（在IL-2浓度基础上每孔加入终浓度为400 ng/ml的CsA）;IL-2受体拮抗剂组（在IL-2浓度基础上每孔加入终浓度为8μg/ml IL-2受体拮抗剂）,孵育72 h后四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测细胞增殖情况。Ficoil法分离SAA患者的骨髓单个核细胞后分为3组:CsA组（加入终浓度为400 ng/ml的CsA）、IL-2组（加入终浓度为100 U/ml的IL-2）和对照组（不加任何刺激物）,孵育18 h后加入佛波酯等活化4 h,流式细胞仪检测CD8+HLA-DR+T细胞胞内肿瘤坏死因子β（TNF-β）蛋白的表达水平。结果 IL-2浓度为10、100、1000 U/L时IL-2组CD8+HLA-DR+T细胞增殖[吸光度（A）值]分别为0.36±0.12、0.41±0.12、0.46±0.14,明显高于未加IL-2的空白对照（0.23±0.11）,亦高于同等IL-2浓度下的CsA组（0.18±0.05、0.19±0.00、0.20±0.04）和IL-2受体拮抗剂组（0.18±0.05、0.17±0.04、0.18±0.03,均P<0.05）;而CsA组和IL-2受体拮抗剂组间差异无统计学意义（P>0.05）。IL-2组CD8+HLA-DR+T细胞胞内TNF-β蛋白表达（64%±25%）明显高于对照组（46%±22%）;CsA组（27%±20%）明显低于对照组（均P<0.05）。结论 IL-2不仅显著刺激SAA患者CD8+HLA-DR+T细胞体外增殖,还可促进该群细胞分泌高水平的TNF-β,而CsA和IL-2受体拮抗剂不仅能抑制此增殖作用,同时CsA亦能显著抑制CD8+HLA-DR+T细胞分泌TNF-β。