核酸提取方法在聚合酶链反应测定乙肝病毒核酸中的评价附视频

目的　对不同核酸提取方法在荧光定量聚合酶链反应 (FQ PCR)检测血清乙型肝炎病毒核酸 (HBVDNA)含量中应用进行评价 ,为临床方法学选择和实验结果的评价提供理论依据。方法　选用直接煮沸裂解法、NP 4 0煮沸裂解法、沉淀煮沸裂解法、磁珠核酸提取法等 4种核酸提取方法提取乙型肝炎血清标本和含不同含量肝素的血清标本中HBVDNA模板 ,用荧光实时定量PCR法对其进行准确定量 ,从提取效率、抗干扰能力方面进行评价。结果　 4种核酸提取方法中磁珠核酸提取法提取效率为最高 ,对数换算后 ,以此相对提取效率为 10 0 % ,则直接煮沸裂解法为最低 81% (P <0 0 5 )、NP 4 0煮沸裂解法为 95 % (P >0 .0 5 )、沉淀煮沸裂解法为 88.7% (P <0 .0 5 ) ;从抗干扰能力方面 ,当肝素含量为 5 0 0U/ml时 ,磁珠核酸提取法抗干扰能力最强 ,沉淀煮沸裂解法次之、直接煮沸裂解法和NP 4 0煮沸裂解法为最差 ,其HBVDNA含量抑制率分别为 9.4 %、13.5 %、35 .4 %、5 2 .7%。结论　本实验结果认为磁珠核酸提取法为实验室首选的核酸提取方法。