LIM结构域蛋白KyoT相互作用分子的筛选

被引：4

作者：

李荣

王冀姝

孙强

王键

杨曦

黄红燕

周鹏

韩骅

机构：

[1] 第四军医大学医学遗传学与发育生物学教研室,第四军医大学医学遗传学与发育生物学教研室,第四军医大学医学遗传学与发育生物学教研室,第四军医大学医学遗传学与发育生物学教研室,第四军医大学医学遗传学与发育生物学教研室,第四军医大学医学遗传学与发育生物学教研室,第四军医

来源：

遗传学报 | 2002年 / 02期

关键词：

LIM蛋白; KyoT; PIAS1; 酵母双杂交;

D O I：

暂无

中图分类号：

Q591.2 [蛋白质代谢];

学科分类号：

071010 ; 081704 ;

摘要：

KyoT为LIM结构域蛋白 ,可与转录因子RBP Jk相互作用。为了研究其功能 ,用酵母双杂交法筛选了与KyoT相互作用的蛋白。以KyoT2为诱饵筛选人淋巴结cDNA文库 ,从 5× 10 6 个克隆中共获得 4 2个阳性克隆。提取质粒进行酶切鉴定 ,获得 2 2个非重复克隆。对此 2 2个克隆进行序列分析 ,共获得 13种基因 ,其中包括已知的KyoT相互作用蛋白RBP Jk和两个未知基因。另一种被筛选到的已知基因是激活状态的信号转导物和转录因子 1活化物的抑制蛋白 (proteininhibitorofactivatedsignaltransducerandactivatoroftranscription 1,PIAS1)。由于KyoT在小鼠睾丸中表达较高 ,因此进一步探讨了KyoT2与PIAS1的相互作用。并首先在酵母中证实KyoT2与PIAS1的相互作用并得到阳性结果。进而在大肠杆菌中表达纯化了KyoT2蛋白 ,并以此为抗原制备了抗KyoT2多克隆抗体 ,再用GST pulldown实验验证了KyoT2和PIAS1在体外的相互作用。成功筛选了KyoT相互作用蛋白 ,发现并验证了KyoT与PIAS1的相互作用 ,对探讨KyoT的功能具有重要意义

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页码：175 / 180

页数：6

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