万寿菊RAPD分子标记优化体系的建立

被引:12
作者
沈一岚
续九如
李福荣
张继冲
机构
[1] 北京林业大学生物学院
关键词
万寿菊; RAPD; 反应体系; 正交设计;
D O I
10.16115/j.cnki.issn.1005-7129.2006.01.004
中图分类号
S682.11 [];
学科分类号
090706 ;
摘要
以雄性不育和可育万寿菊及其子代为材料,在PE-2400型PCR仪上进行扩增,通过3次正交试验设计,优化得到了最佳的RAPD反应体系,确定了各个因素的最佳水平。在20 μL反应体系中,最佳的浓度配比为:10×Buffer中含10.00 mmol·L-1Tris-HCl、50.00 mmol·L-KCl、0.001%gelatin、dNTP0.25 mmol· L-1、TaqDNA聚合酶1.5 U、MgCl2 1.25 mmol·L-1、DNA20-60 ng、引物0.60 pmol·μL-1,预变性时间5 min, 退火温度37℃较好,1 min的延伸时间也满足了2 kb以下的DNA片段合成,循环35次能得到较好的 RAPD图谱。
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