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万寿菊RAPD分子标记优化体系的建立
被引:12
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续九如
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张继冲
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[1] 北京林业大学生物学院
来源:
关键词:
万寿菊;
RAPD;
反应体系;
正交设计;
D O I:
10.16115/j.cnki.issn.1005-7129.2006.01.004
中图分类号:
S682.11 [];
学科分类号:
090706 ;
摘要:
以雄性不育和可育万寿菊及其子代为材料,在PE-2400型PCR仪上进行扩增,通过3次正交试验设计,优化得到了最佳的RAPD反应体系,确定了各个因素的最佳水平。在20 μL反应体系中,最佳的浓度配比为:10×Buffer中含10.00 mmol·L-1Tris-HCl、50.00 mmol·L-KCl、0.001%gelatin、dNTP0.25 mmol· L-1、TaqDNA聚合酶1.5 U、MgCl2 1.25 mmol·L-1、DNA20-60 ng、引物0.60 pmol·μL-1,预变性时间5 min, 退火温度37℃较好,1 min的延伸时间也满足了2 kb以下的DNA片段合成,循环35次能得到较好的 RAPD图谱。
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陈明林
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何礼
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袁水全
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莫邦辉
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姚光贵
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林宏辉
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陈放
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范昌发
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孙春昀
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孙毅
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王景雪
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何军贤
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段世华
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李绍清
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朱英国
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陈尚平
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李倩中
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刘晓青
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黄敏仁
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曾大力
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孙宗修
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柴守诚
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