实时荧光定量-聚合酶链反应检测食品中金黄色葡萄球菌方法的研究

被引:8
作者
徐德顺
韩健康
吴晓芳
机构
[1] 浙江省湖州市疾病预防控制中心
关键词
食品; 金黄色葡萄球菌; TaqMan探针; 荧光定量PCR;
D O I
暂无
中图分类号
R155.5 [食品卫生与检验];
学科分类号
摘要
目的利用实时荧光定量-聚合酶链反应(real-time PCR)技术,建立食品中金黄色葡萄球菌(金葡萄)污染的快速敏感特异的检测方法。方法以金葡菌的FemB基因作为靶序列,设计一对引物和探针,以金葡菌菌株提取核酸DNA作为模板,优化引物和探针的浓度比和Mg2+浓度,以金葡菌和10种相关细菌考核检测体系的灵敏性、稳定性和特异性。并初步应用于样品的检测。结果本研究建立的反应体系在引物和探针的浓度为0.8μmol/L、0.6μmol/L,Mg2+浓度为3.5 mmol/L时,具有良好的特异性和敏感性。在10株相关菌株的检测中,除金葡菌出现很好的阳性外,其余菌株均为阴性。在纯菌条件下,最低检测限为44 cfu/m。l稳定性分析表明:同一样品重复检测3次Ct值的变异系数均<5%。检测样品结果显示real-tim e PCR方法较传统方法敏感、快捷、简便。结论该方法特异性强,稳定性高,操作简便快捷,适应食品微生物检验发展需要,具有较大的推广及应用价值。
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