白蛋白信号肽引导天然N-端的rBPTI在毕赤酵母中高效分泌表达

被引：5

作者：

杨莉莉 ^{[1
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贺巾超 ^{[1
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董文 ^{[2
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范伟全 ^{[1
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凡炼炼 ^{[1
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潘秦 ^{[1
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牟旭鹏 ^{[1
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颜炜群 ^{[1
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机构：

[1] 吉林大学再生医学科学研究所生物化学研究室

[2] 天津市红桥医院骨科

来源：

吉林大学学报(医学版) | 2007年 / 01期

基金：

国家高技术研究发展计划(863计划);

关键词：

牛胰蛋白酶抑制剂; 白蛋白信号肽; 毕赤酵母;

D O I：

10.13481/j.1671-587x.2007.01.006

中图分类号：

Q786 [基因的表达];

学科分类号：

071007 ; 0836 ; 090102 ;

摘要：

目的:探讨在毕赤酵母(Pichia pastoris)中高效分泌表达具有天然N-端序列的rBPTI。方法:将白蛋白信号肽(hsasp)和bpti基因连接并构建真核表达载体pPICZ/hsasp-bpti,电击转化毕赤酵母菌株X-33,用PCR法、SDS-PAGE和胰蛋白酶抑制活性分析筛选阳性转化菌。结果:转染pPICZ/hsasp-bpti的毕赤酵母X-33工程菌能够高效地分泌表达rBPTI;培养上清中rBPTI含量约200 mg.L-1;SDS-PAGE和质谱分析结果显示rBPTI相对分子质量分别为6 500和6 508;rBPTI的N-端测序结果表明其N-端15个氨基酸序列与天然BPTI完全一致;胰蛋白酶活性抑制分析结果表明,抑制常数Ki=(2.6±0.1)×10-9,与天然BPTI一致。结论:hsasp能够在毕赤酵母中高效地引导分泌表达天然N-端氨基酸序列的rBPTI,其表达量达200 mg.L-1。

引用

页码：17 / 20

页数：4

共 5 条

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