人Cu,Zn-SOD在酵母系统中的表达

被引：6

作者：

施惠娟

陈哲宇

李明峰

魏东芝

吴祥甫

袁勤生

机构：

[1] 华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室!生物化学研究所

[2] 上海中国科学院上海生物化学研究所

[3] 上海

[4] 中国科学院上海生物化学研究所!上海

来源：

华东理工大学学报 | 2000年 / 06期

关键词：

人Cu,Zn-SOD; Pichia pastoris; 胞内表达; 蛋白印迹; 基因;

D O I：

10.14135/j.cnki.1006-3080.2000.06.006

中图分类号：

学科分类号：

摘要：

甲醇酵母 (Pichia pastoris)是一种理想的真核蛋白高水平表达系统。将人 Cu,Zn- SOD基因克隆到酵母整合型质粒载体 p PIC3.5K,经转化 his4缺陷型酵母 GS1 1 5,用 MD培养基及 PCR方法筛选阳性转化子 ,并用含 G41 8的 YPD培养基筛选多拷贝转化子 ,经甲醇诱导表达。 SDS-PAGE和蛋白质印迹杂交结果证实了表达产物为重组的人 Cu,Zn- SOD,经计算机扫描分析 ,表达量占酵母可溶性蛋白的 1 4% ,所表达的人 Cu,Zn- SOD比活可达每毫克蛋白质 77U。

引用

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