清热解毒方连花汤提取物诱导子宫内膜癌HEC-1A及Ishikawa细胞自噬的作用及其机制研究

目的探讨清热解毒方连花汤（黄连15 g、白花蛇舌草15 g、半枝莲15 g、生黄芪20 g等）正丁醇和水提取物对人子宫内膜癌细胞系HEC-1A及Ishikawa作用12 h、24 h后自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3（light chain 3,LC3）表达及其相关通路的影响。方法采用Real-time PCR检测LC3mRNA;采用Westernbolt检测LC3蛋白;采用PhosflowTM检测雷帕霉素靶蛋白（MTOR）、蛋白激酶B（AKT）表达。结果与阴性对照组比较,正丁醇组12 h HEC-1A中LC3 mRNA升高但24 h下降,而LC3蛋白在12 h和24 h均下降,水提组则正好相反,雷帕霉素组LC3表达均下降,同时中药复方醇提和水提组AKT/mTOR通路均不同程度表达增加（P<0.05）;而在Ishikawa中,与阴性对照组比较,三组处理后LC3 mRNA表达在12 h增加,除雷帕霉素组其余两组24 h均下降。醇提组12 h、水提组24 h、雷帕霉素组AKT/mTOR双表达与阴性对照组比较,差异均有统计学意义（P<0.05）。结论在HEC-1A中,连花汤正丁醇提取物与雷帕霉素作用类似,可能激活AKT/mTOR通路抑制细胞自噬;而在Ishikawa细胞中连花汤正丁醇组与水提组均通过激活AKT/mTOR通路自噬先增加后抑制,与雷帕霉素作用后自噬均增加不同。