北柴胡糖基转移酶基因BcUGT8的克隆、序列分析及其原核表达载体构建

被引：15

作者：

徐洁森 ^{[1
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魏建和 ^{[1
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陶韵文 ^{[1
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孙晶 ^{[1
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隋春 ^{[1
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机构：

[1] 中国医学科学院北京协和医学院药用植物研究所

[2] 中草药物质基础与资源利用教育部重点实验室

[3] 佳木斯大学药学院

[4] 东北林业大学生命科学院

来源：

中草药 | 2013年 / 44卷 / 17期

基金：

北京市自然科学基金;

关键词：

北柴胡; 糖基转移酶基因; 序列分析; 原核表达载体; PCR;

D O I：

暂无

中图分类号：

R282 [中药材];

学科分类号：

100810 [分子生药学];

摘要：

目的克隆北柴胡Bupleurum chinense中可能参与柴胡皂苷生物合成的糖基转移酶基因BcUGT8,构建其原核表达载体,为通过体外表达和纯化蛋白的催化活性,分析验证其功能奠定基础。方法在Roche(454)GS FLX系统高通量测序已获得部分cDNA序列基础上,通过cDNA末端快速扩增技术(RACE)和长距离PCR扩增方法(LD-PCR)克隆全长cDNA。设计含有酶切位点的PCR引物,PCR扩增其开放阅读框(ORF),酶切后,插入到pET-28a(+)载体中,构建出原核表达载体。结果扩增到北柴胡1个糖基转移酶(UGT)基因全长cDNA,构建了这一基因的原核表达载体。结论通过BcUGT8基因的全长cDNA克隆、序列分析和原核表达载体的构建,为后续开展体外酶蛋白表达、纯化和催化活性分析实验,验证其生物功能奠定了基础。

引用

页码：2453 / 2459

页数：7

共 11 条

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