超低温(-196℃)保存角膜缘上皮细胞的生物活性研究

目的探讨不同的低温冷冻条件对角膜缘上皮细胞生物活性的影响。方法采用不同浓度梯度的二甲基亚砜和不同的降温速率保存兔角膜缘上皮组织;以台盼蓝染色方法计数角膜缘表层上皮细胞的存活率;通过体外细胞培养方法观察低温保存的角膜缘上皮细胞生长情况,并采用若丹明B染色法对原代细胞的增殖能力进行定量测定;将低温保存带有角膜缘的角膜进行器官培养,采用SABC免疫组织化学染色法检测角膜缘上皮细胞的PCNA表达。结果二甲基亚砜浓度梯度对低温保存的角膜缘表层上皮细胞存活率有显著影响,程序降温的效果明显优于非程序降温。体外细胞培养显示,二甲基亚砜浓度梯度和降温方法对角膜缘上皮细胞增殖能力无显著性影响(P>0.05);血清培养组优于无血清培养组(P<0.05,P<0.01)。器官培养1周时,低温保存的角膜缘上皮细胞核中均可见PCNA表达,染色阳性细胞主要在基底细胞层。结论角膜缘干细胞具有较强血清依赖性和低温耐受性,提示超低温保存角膜缘上皮具有可行性。