L─山梨酮脱氢酶基因在大肠杆菌中的克隆和表达

被引:13
作者
郭新友
尹光琳
机构
[1] 中国科学院上海生物工程研究中心!上海
关键词
L-山梨酮脱氢酶基因; PCR; 表达载体; SD序列; 克隆; 表达;
D O I
10.13344/j.microbiol.china.1998.03.005
中图分类号
Q939.97 [工业微生物学];
学科分类号
082203 ;
摘要
参照已知的L-山梨酮脱氢酶基因序列,合成了两个引物序列,以AcetobacterliqueficiensIF012258的染色体DNA为模板进行PCR反应,克隆得到了L-山梨酮脱氢酶基因,经酶切验证与预期结果相同,序列测定结果也与已知序列一致。采用PCR方法在此基因的两端加上了E.coRI和HindⅢ两个酶切位点,经E.coRI和HindⅢ酶切后去掉了两端的多余序列后,将此片段连接到pKKH上,经诱导无蛋白表达,采用RcaI酶切启动子端,对载体pKKH则采用Mcol酶切,使表达载体的SD序列与起始密码子ATG之间的距离减少了一个碱基,终止子端仍采用HindⅢ酶切,连接后进行转化,得到的阳性克隆经诱导后有明显的蛋白表达条带,酶活力也比对照明显增高。此工作为构建可直接利用L-山梨糖发酵产生维生素C前体2-酮基-L-古龙酸的基因工程菌打下了基础。
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共 3 条
[1]   新组合菌系SCB329-SCB933利用L-山梨糖发酵产生维生素C前体——2-酮基-L-古龙酸的研究 Ⅰ.新组合菌系SCB329-SCB933的生物学特性 [J].
尹光琳 ;
何建明 ;
任双喜 ;
宋祺 ;
叶晴 ;
林红雨 ;
陈策实 ;
郭新友 .
工业微生物, 1997, (01) :1-7
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