用Red系统快速敲除痢疾杆菌asd基因

目的 :用Red系统快速敲除痢疾杆菌asd基因。方法 :本研究首先合成一对引物 (每一条的 5′端与asd基因同源 ,3′端与氯霉素抗性基因同源 ) ,并用来获得氯霉素抗性基因的PCR产物 ,然后电击转化至大肠杆菌DH5α和痢疾杆菌福氏 2a 2 4 5 7T中 ,在λRed重组系统的帮助下 ,通过氯霉素抗性基因两侧的asd基因序列在体内与asd基因发生同源重组 ,置换了DH5α和 2 4 5 7T基因组中的asd基因 ,最后又利用氯霉素抗性基因两端的FRT位点 ,通过FTP位点专一性重组将氯霉素抗性基因剔除。结果与结论 :获得了asd基因被完全敲除且不带氯霉素抗性基因的大肠杆菌和痢疾杆菌 ,使Red系统在大肠杆菌以外微生物中的应用获得成功。