黄芪皂甙Ⅳ联合骨髓间充质干细胞移植对大鼠脑缺血/再灌注损伤海马神经元凋亡及相关基因表达的影响

目的探讨黄芪皂甙Ⅳ联合骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植对缺血再灌注大鼠海马神经细胞凋亡及Bcl-2、Bax、Caspase-3表达的影响。方法实验动物随机分为假手术组、模型组、BMSCs组、BMSCs+黄芪组。采用线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血(MCAO)模型,BMSCs组、BMSCs+黄芪组分别于建模成功后3h经尾静脉注射已制备好的PKH26标记BMSCs悬液。另外BMSCs+黄芪组于缺血前5min、缺血后12h,24h腹腔注射黄芪皂甙Ⅳ。缺血再灌注72h后,各组进行神经功能评分,应用荧光显微镜观察海马PKH-26标记的移植BMSCs分布,采用免疫组化法和实时荧光定量PCR方法检测大鼠海马Bcl-2、Bax、caspase-3的表达,运用TUNEL方法检测神经元细胞凋亡指数。结果 PKH-26标记的BMSCs在海马有表达。与模型组比较,BMSCs组与BMSCs+黄芪组均能够使大鼠神经功能损害评分降低(P<0.01),BMSCs+黄芪组神经功能恢复最为明显(P<0.05)。模型组Bcl-2、Caspase-3、Bax蛋白表达及细胞凋亡与假手术组差异显著(P<0.01)。与模型组比较,BMSCs+黄芪组和BMSCs组均可下调Caspase-3、Bax蛋白表达和细胞凋亡指数(P<0.05),上调Bcl-2蛋白表达及Bcl-2/Bax比值(P<0.05),其中以BMSCs+黄芪组作用更为显著(P<0.05)。实时荧光定量PCR显示:与模型组和BMSCs组比较,BMSCs+黄芪组能显著下调Caspase-3、Baxm RNA相对表达(P<0.05),上调Bcl-2mRNA相对表达(P<0.05)。结论黄芪皂甙Ⅳ联合BMSCs移植对脑缺血再灌注神经元细胞凋亡有协同抑制作用,其作用机制可能与黄芪皂甙Ⅳ促进BMSCs抑制Bax、caspase-3表达,增强Bcl-2表达和Bcl-2/Bax比值有关。