锥栗自然居群ISSR-PCR分析技术的建立

被引：7

作者：

刘国彬 ^{[1
,2
]}

龚榜初 ^{[1
]}

罗正荣 ^{[2
]}

机构：

[1] 中国林业科学研究院亚热带林业研究所

[2] 华中农业大学园艺植物生物学教育部重点实验室

来源：

果树学报 | 2009年 / 26卷 / 01期

关键词：

锥栗; 自然居群; ISSR;

D O I：

10.13925/j.cnki.gsxb.2009.01.022

中图分类号：

S664.2 [栗];

学科分类号：

090201 ;

摘要：

提取野生锥栗的基因组DNA作为ISSR-PCR模板,对反应体系中的模板用量、Mg2+浓度、dNTPs浓度、引物浓度和TaqDNA聚合酶用量5个主要影响因素进行梯度试验,并对扩增程序中的退火温度与循环次数进行了探讨,初步确立了适合野生锥栗的ISSR-PCR分析技术体系,即25μL反应体系中,模板DNA40或50ng、Mg2+2.25mmol.L-1、dNTPs0.2mmol.L-1、引物0.2μmol.L-1、TaqDNA聚合酶1.0U;PCR扩增程序为:94℃预变性3min;然后94℃变性45s,(Tm+2～4℃)退火45s,72℃延伸2min,共32个循环;最后72℃充分延伸5min;1.5%琼脂糖凝胶电泳分离扩增产物。

引用

页码：103 / 107

页数：5

共 20 条

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