马蔺ISSR-PCR反应体系的建立与优化

被引：14

作者：

王育青 ^{[1
,2
]}

王晓晶 ^{[3
]}

王建光 ^{[3
]}

机构：

[1] 中国农业科学院研究生院

[2] 中国农业科学院草原研究所/农业部草原资源与生态重点开放实验室

[3] 内蒙古农业大学生态环境学院

来源：

中国草地学报 | 2010年 / 32卷 / 02期

关键词：

马蔺; 均匀设计; ISSR-PCR;

D O I：

暂无

中图分类号：

S688.4 [草坪与地被植物];

学科分类号：

090711 [园林植物与观赏园艺学];

摘要：

以内蒙古呼和浩特市近郊野生马蔺DNA为模板,采用均匀设计,通过5因素5水平和5因素3水平两轮均匀优化试验,对影响ISSR-PCR扩增结果的一些因素(Mg2+、dNTP、引物、TaqDNA聚合酶和模板DNA浓度等)进行优化筛选,建立了适合马蔺的最佳ISSR-PCR反映体系:在25μl反应体系中,包括2.5μl 10×PCR Buffer、2.0mmol/L Mg2+、2.5μmol/L dNTP、1μmol/L引物1、.5U TaqDNA聚合酶、50ng模板DNA。在此基础上对扩增程序中的循环次数、退火温度进行筛选,获得的扩增程序为:94℃预变性3min;然后进行40个循环(94℃变性45s,52.3～60.5℃退火30s,72℃延伸1.5 min);循环结束后,72℃延伸5min。

引用

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页数：6

共 15 条

[1]

均匀设计及其在药学研究中的应用 [J].