重组人蛋白激酶CK 2α亚基的原核表达、纯化与鉴定

被引：14

作者：

刘新光

梁念慈

马涧泉

机构：

[1] 广东医学院医用生化研究所!湛江,广东医学院医用生化研究所!湛江,中山医科大学生化教研室!广州

来源：

中国生物化学与分子生物学报 | 2000年 / 01期

基金：

广东省自然科学基金;

关键词：

人蛋白激酶CK2α亚基; 原核表达; 蛋白质纯化;

D O I：

10.13865/j.cnki.cjbmb.2000.01.004

中图分类号：

Q55 [酶]; Q812 [];

学科分类号：

071010 ; 081704 ; 0836 ; 090102 ;

摘要：

将构建成功的人蛋白激酶 CK2 α亚基 c DNA的重组质粒 ,转化大肠杆菌 BL2 1 ( DE3) ,IPTG诱导后获特异高效表达 ,表达蛋白占菌体总蛋白的 30 % ,但大多数重组蛋白以不溶形式存在 .表达产物依次进行 DE- 5 2、P1 1磷酸纤维素和肝素 - Sepharose柱层析分离 ,最后从 30 9mg可溶性蛋白质中得到 6.1 mg纯化蛋白 . SDS- PAGE显示纯化的蛋白质为一分子量 4 2 k D的单一蛋白带 .Western- blot的结果证明 :纯化的表达产物与抗人 CK2α抗体可发生特异性免疫反应 . CK2α和β亚基等摩尔分子混合可组成有完全活性的全酶 .重组的 CK2全酶的性质和功能与该酶的已知特性一致 .这些结果证明重组蛋白是人蛋白激酶 CK2 α亚基

引用

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页数：6

共 4 条

[1] 重组人蛋白激酶CK2α亚基cDNA的克隆与测序 [J].

刘新光 ;

梁念慈 ;

马涧泉 .

中山医科大学学报, 1999, (02) :82-83

[2] 重组人蛋白激酶CK2β亚基cDNA的克隆与测序 [J].

刘新光 ;

梁念慈 ;

马涧泉 ;

刘文 .

中国生物化学与分子生物学报, 1999, (02) :58-61

[3] 人早幼粒白血病HL-60细胞蛋白激酶CK2的研究 [J].

翁云 ;

徐美亦 ;

梁念慈 .

广东医学院学报, 1999, (01) :5-8

[4]

Reconstitution of heterologous and chimeric casein kinase II with recombinant subunits from human and Drosophila : Identification of species-specific differences in the Β subunit.[J].Wey-Jinq Lin;Rolf Jakobi;Jolinda A. Traugh.Journal of Protein Chemistry.1994, 2

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