知母及其不同炮制品的指纹图谱建立与抗氧化活性的谱-效关系研究

目的:建立知母及其不同炮制品乙醇提取物和丙酮提取物的指纹图谱,并考察其与抗氧化活性的谱-效关系。方法:分别采用高效液相色谱法(HPLC)和高效液相色谱-蒸发光散射检测法(HPLC-ELSD),色谱条件分别为色谱柱Thermo BDS Hypersil C18、流动相乙腈-0.2%醋酸水溶液、流速1.0 m L/min、柱温30℃、检测波长258 nm、进样量10μL以及色谱柱XDB-C18、流动相乙腈-0.2%醋酸水溶液(梯度洗脱)、流速0.9 m L/min、柱温30℃、雾化器温度40℃、氮气流速1.6 m L/min、进样量10μL。分别以芒果苷、知母皂苷BⅡ为参照,采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004A版)》绘制20批知母及其炮制品乙醇提取物和丙酮提取物的指纹图谱并进行相似度评价,标定共有峰。以1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基清除率为指标,考察20批知母及其炮制品乙醇提取物和丙酮提取物的抗氧化活性。以DPPH自由基清除率为因变量、共有峰峰面积为自变量,采用偏最小二乘回归法分别分析知母乙醇提取物和丙酮提取物与抗氧化活性的谱-效关系。结果:从20批知母炮制品乙醇提取物指纹图谱中标定出共有峰8个(M1～M8),指认出芒果苷(色谱峰M7);相似度为0.389～1.000;从丙酮提取物指纹图谱中标定出共有峰7个(S1～S7),指认出知母皂苷BⅡ(色谱峰S5);相似度为0.044～0.999。20批知母及其炮制品乙醇提取物的DPPH自由基清除率为21.23%～81.39%,生知母显著低于盐知母、酒知母(P<0.001);丙酮提取物的DPPH自由基清除率为49.73%～83.78%,生知母显著高于盐知母、酒知母、炒知母(P<0.001)。知母乙醇提取物图谱中峰M2～M7的标准化回归系数均大于0,与抗氧化活性成正相关;仅峰M7的变量重要性投影(VIP)值大于1。知母丙酮提取物图谱中峰S4～S7的标准化回归系数均大于0,与抗氧化活性成正相关;VIP值大小排序依次为峰S5>S6>S4,且VIP值均大于1。结论:成功建立知母乙醇提取物和丙酮提取物的指纹图谱。芒果苷(峰M7)可能是知母乙醇提取物抗氧化作用的主要药效物质;知母皂苷BⅡ(峰S5)、峰S6、峰S4可能是知母丙酮提取物抗氧化作用的主要药效物质。