油茶ISSR反应体系建立及优化

被引：42

作者：

温强

叶金山

雷小林

江梅

黄莉莉

江香梅

徐林初

机构：

[1] 江西省植物生物技术重点实验室

来源：

中南林学院学报 | 2006年 / 06期

关键词：

林学; 油茶; ISSR; 反应条件; 优化;

D O I：

10.14067/j.cnki.1673-923x.2006.06.005

中图分类号：

S794.4 [油茶];

学科分类号：

0829 ; 0907 ;

摘要：

以改进的CTAB高盐法提取油茶嫩叶总DNA,进行简单重复序列间扩增(ISSR)分析,分别测试了退火温度、模板DNA浓度、M g2+浓度、dNTP s浓度、T aqDNA聚合酶用量和是否加入去离子甲酰胺对反应结果的影响.油茶ISSR分析的最适反应体系为:在20μL PCR反应体积中,含20 ng模板DNA,2.5 mm o l.L-1M gC l2,0.2 mm o l.L-1dNTP s,1UT aqDNA聚合酶,0.5pm o l.μL-1引物,1%去离子甲基酰胺.扩增程序为:94℃预变性2 m in;94℃变性30 s,52℃退火30 s,72℃延伸90 s,反应38个循环;最后在72℃延伸7 m in.

引用

页码：22 / 26+43 +43

页数：6

共 12 条

[1] 油茶近成熟种子表达的发育相关基因及其分析 [J].

谭晓风 ;

胡芳名 ;

谢禄山 ;

石明旺 ;

张党权 ;

乌云塔娜 .

中南林学院学报, 2005, (04) :17-23

[2] 油茶种子表达的主要储藏蛋白基因及其分析 [J].

胡芳名 ;

谭晓风 ;

仇键 ;

张党权 ;

乌云塔娜 ;

石明旺 .

中南林学院学报, 2005, (04) :24-26+45

[3] 油茶优良无性系的RAPD分子鉴别 [J].

陈永忠 ;

张智俊 ;

谭晓风 .

中南林学院学报, 2005, (04) :40-45

[4] 油茶种子cDNA文库的构建 [J].

胡芳名 ;

谭晓风 ;

石明旺 ;

乌云塔娜 .

中南林学院学报, 2004, (05) :1-4

[5] 油茶总RNA及mRNA的分离与纯化 [J].

张智俊 ;

谭晓风 ;

陈永忠 .

中南林学院学报, 2003, (02) :76-78

[6] ISSR分子标记及其在植物遗传学研究中的应用 [J].

王建波 .

遗传, 2002, (05) :613-616

[7] 我国油茶优良无性系的选育与应用 [J].

韩宁林 .

林业科技开发, 2000, (04) :31-33

[8]

油茶优良无性系组织培养、RAPD分子鉴别和cDNA文库构建的研究[D]. 张智俊.中南林学院 2003

[9] Genetic diversity and relationships of sweetpotato and its wild relatives in Ipomoea series Batatas (Convolvulaceae) as revealed by inter-simple sequence repeat (ISSR) and restriction analysis of chloroplast DNA [J].

Huang, JC ;

Sun, M .

THEORETICAL AND APPLIED GENETICS, 2000, 100 (07) :1050-1060

[10]

Inter-simple sequence repeat （ISSR） amplification for analysis of microsatellite motif frequency and fingerprinting in rice （Oryza sativa L.）[J] . M. W. Blair,O. Panaud,S. R. McCouch.TAG Theoretical and Applied Genetics . 1999 (5)

← 1 2 →