大鼠B细胞淋巴瘤-2基因的克隆及其慢病毒表达载体的构建

被引:4
作者
王雪峰
何援利
机构
[1] 南方医科大学珠江医院妇产科
关键词
基因,bcl-2; DNA,互补; 遗传载体; 病毒;
D O I
暂无
中图分类号
R346 [];
学科分类号
摘要
目的克隆大鼠B细胞淋巴瘤-2(bcl-2)基因全长cDNA,构建及鉴定大鼠bcl-2基因慢病毒表达载体。方法采用RT-PCR法从大鼠脾脏组织中扩增全长bcl-2 cDNA,将扩增产物克隆至pMD18-T载体中,测序正确后,将基因连接到慢病毒载体pGC-FU(含EGFP基因)中,构建慢病毒载体表达质粒pGC-FU-bcl-2,将pGC-FU-bcl-2质粒和包装质粒(pHelper1.0、pHelp-er2.0)共同转染人胚胎肾上皮细胞系293T细胞后,细胞即可分泌携带bcl-2基因的重组慢病毒。将重组慢病毒感染293T细胞,通过Western blot-ting鉴定目的蛋白bcl-2的表达。结果经DNA序列分析测定证实大鼠bcl-2基因序列与GenBank中一致;pGC-FU-bcl-2中携有正确的bcl-2基因,并能转染人胚肾上皮细胞;pGC-FU-bcl-2及包装质粒共转染包装细胞293T细胞能产生重组病毒pGC-FU-bcl-2;目的基因bcl-2能被重组慢病毒高效地转导入人胚肾上皮细胞中,并达到稳定表达,荧光显微镜下能直接观察到荧光蛋白,Westernblotting能检测到bcl-2蛋白在靶细胞中的表达。结论成功克隆了大鼠bcl-2基因并构建了重组慢病毒载体,包装出高浓度慢病毒,转染人胚肾上皮细胞后能够稳定表达bcl-2基因,为进一步研究该基因的功能及细胞凋亡相关疾病的治疗奠定了基础。
引用
收藏
页码:51 / 54
页数:4
相关论文
共 6 条
[1]   小鼠RelB基因RNAi慢病毒载体的构建与鉴定 [J].
包杰 ;
王前 ;
郑磊 ;
曾方银 ;
刘杰 ;
熊石龙 ;
裘宇容 ;
李娟 .
解放军医学杂志, 2007, (06) :585-587
[2]   促性腺激素释放激素激动剂对化疗损伤卵巢功能保护作用的实验研究 [J].
袁光文 ;
沈铿 ;
杨佳欣 .
中华妇产科杂志, 2005, (10) :22-25
[3]   鸡Bcl-2基因的克隆及其对卵泡颗粒细胞凋亡的影响 [J].
姜勋平 ;
周东蕊 ;
杨利国 ;
张书霞 ;
茆达干 ;
叶荣 .
中国兽医学报, 2002, (01) :87-89
[4]   细胞凋亡与疾病 [J].
江雁 .
中国综合临床, 2000, (03) :166-167
[5]   Interleukin-10 modulates pro-apoptotic effects of TNF-α in human articular chondrocytes in vitro [J].
John, T. ;
Mueller, R. D. ;
Oberholzer, A. ;
Zreiqat, H. ;
Kohl, B. ;
Ertel, W. ;
Hostmann, A. ;
Tschoeke, S. K. ;
Schulze-Tanzil, G. .
CYTOKINE, 2007, 40 (03) :226-234
[6]   Activation of Akt (PKB) and suppression of FKHRL1 in mouse and rat oocytes by stem cell factor during follicular activation and development [J].
Reddy, P ;
Shena, LJ ;
Ren, C ;
Boman, K ;
Lundin, E ;
Ottander, U ;
Lindgren, P ;
Liu, YX ;
Sun, QY ;
Liu, K .
DEVELOPMENTAL BIOLOGY, 2005, 281 (02) :160-170