肠道病毒71型外壳蛋白VP1在Pichia pastoris酵母中的表达

被引：12

作者：

杨国威

何雅清

薛颖

周世力

马骊

金奇

机构：

[1] 病毒基因工程国家重点实验室,深圳市卫生防疫站,病毒基因工程国家重点实验室,病毒基因工程国家重点实验室,病毒基因工程国家重点实验室,病毒基因工程国家重点实验室北京　,深圳　,北京　,北京　,北京　,北京

来源：

病毒学报 | 2003年 / 02期

关键词：

肠道病毒71型; VP1; Pichiapastoris酵母; 基因表达;

D O I：

10.13242/j.cnki.bingduxuebao.001460

中图分类号：

R373.3 [节肢动物传播的病毒（虫媒病毒）];

学科分类号：

100103 ; 100705 ;

摘要：

利用逆转录聚合酶链式反应(RT PCR)扩增肠道病毒71型(EV71)外壳蛋白VP1基因,经序列测定证实后,构建重组表达质粒pPIC9K/VP1,转化Pichiapastoris酵母宿主菌GS115,甲醇诱导表达。SDS PAGE分析显示:表达产物的分子量约为34kD,与天然VP1大小一致。凝胶薄层扫描分析显示:目的蛋白表达量占培养上清总蛋白的60%以上。ELISA实验表明,重组蛋白VP1具有较好的抗原性。使用饱和硫酸铵分级沉淀法初步纯化的表达产物,能够较特异性地与EV71感染者血清中的抗体产生反应,而且与抗柯萨奇病毒A16特异性抗体不产生反应。通过利用表达产物作为抗原,对156份血清的检测初步证实,重组蛋白VP1可以作为检测EV71感染的的检测用抗原。

引用

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