miRNA模拟物转染人支气管上皮细胞的影响因素和条件筛选附视频

目的:研究miRNA模拟物浓度、脂质体浓度、转染时间对人支气管上皮细胞转染效果和毒性的影响,筛选miRNA模拟物转染人支气管上皮细胞的最适宜条件。方法:分别应用0、10、30、50nmol/L化学合成的、经Cy3标记的miRNA模拟物,以0、0.1%、0.3%、0.5%浓度的脂质体转染剂转染人支气管上皮细胞,转染6、12、24h后应用荧光显微镜观察细胞转染情况,计算荧光强度,评价转染效果;转染24h后,应用WST8法检测不同转染条件对细胞活性的影响。结果:随着miRNA模拟物、脂质体浓度增加和转染时间的延长,细胞内荧光信号增强。30和50nmol/LmiRNA模拟物的转染效率明显高于10nmol/L组（P<0.05）;0.3%和0.5%脂质体组的转染效率明显高于0.1%组（P<0.05）;转染24h的荧光强度明显高于转染12h和6h组（P<0.05）。与对照组相比,转染24h后各转染组细胞活性无显著性变化（P>0.05）。结论:人支气管上皮细胞适合应用脂质体进行化学合成miRNA模拟物的转染研究,miRNA模拟物浓度、脂质体浓度、转染时间均是转染的重要影响因素,30nmol/LmiRNA模拟物、0.3%脂质体、转染24h可获得理想的转染效果,转染后对细胞活性无影响。