豆粕发酵用高产蛋白酶芽孢杆菌的筛选及鉴定

试验旨在从生境中筛选适用于高肽含量发酵豆粕的高产蛋白酶芽孢杆菌。初筛:样品于无菌的8.5%生理盐水中均质后80℃水浴10 min,10倍梯度稀释至一定倍数,取后三个梯度涂布于ND双层平板(上层为营养琼脂,下层为脱脂牛奶),37℃培养24 h,通过革兰氏染色、镜检以及菌落周围水解透明圈的情况对菌株进行筛选;复筛:初筛得到的菌株接种于豆粕发酵培养基,180 r/min、37℃培养48 h,根据上清液中蛋白酶活性进行复筛;菌种鉴定:运用16S rDNA和GyrA部分序列扩增测序对筛选得到的菌株进行鉴定。通过初筛,从样品中得到了7株产蛋白酶丰富的G+芽孢杆菌;复筛的条件下T1发酵上清液蛋白酶活性达1 547.49 U,极显著高于其它6株(P<0.01);经分子鉴定得T1为解淀粉芽孢杆菌。由此,从豆豉中筛选得到一株适用于豆粕发酵、产蛋白酶丰富的解淀粉芽孢杆菌T1,它在37℃、180 r/min条件下于豆粕发酵培养基中培养42 h后上清液蛋白酶活性可达1 683.99 U。