检测伪狂犬病的PCR方法的建立及其在临床诊断中的应用

根据文献 ,通过计算机分析设计并合成了 1对用于扩增伪狂犬病病毒 (pseudorabiesvirus ,PRV)gB 基因2 81bp片段的引物 ,上游引物 (P1)位于gB 基因的 182 7～ 185 1位 ,下游引物 (P2 )位于 gB 基因的 2 0 83～ 2 10 7位。以PRV闽A株细胞培养毒为模板 ,筛选最佳反应条件和试剂工作浓度 ,建立了检测PRV的PCR方法。应用该方法对保存的 16株伪狂犬病强弱毒株的细胞培养液进行基因扩增 ,均获得了 2 81bp的特异性目的DNA片段。可是 ,对正常细胞与其它 6种引起猪病毒性疫病相关病毒进行检测 ,结果均为阴性 ,没有出现交叉反应。对扩增产物测序 ,结果序列与文献报道一致 ,证明PCR扩增产物和方法的特异性。对PRV闽A株细胞毒提取物DNA进行检测 ,其最低检出量为 15 8pg。用病毒分离、双抗体夹心ELISA和PCR等 3种方法检测 1994～ 2 0 0 0年期间送检的临床样品和保存的PRV毒种 ,对所获得的结果进行 χ2 分析 ,证明PCR检出率明显高于前 2种方法。对 1999～2 0 0 1年期间广东、福建、海南等省的 76个大中型猪场送检的 348份病料进行检测 ,检出阳性病料 6 8份 ,病料阳性率为 19 5 4 % ;检出阳性猪场 2 7个 ,猪场阳性率为 35 5 3%。对 2 7个阳性猪场分析发现 ,种猪场阳性率为 7 4 1%(2 / 2 7) ,商品猪场阳性率为 92 5 9%