费氏中华根瘤菌与耐盐有关的DNA片段的亚克隆和测序

将费氏中华根瘤菌（Ｓｉｎｏｒｈｉｚｏｂｉｕｍ　ｆｒｅｄｉｉ） ＲＴ１９与耐盐有关的２３ｋｂ ＤＮＡ片段用ＢａｍＨＩ酶切成大小不同的长度，分别与质粒 ｐＭＬ１２２连接，然后转化大肠杆菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ）Ｓ１７－１，筛选出３个转化子。以这些转化子为供体，ＲＴ１９的盐敏感突变株ＲＣ３－３为受体，分别进行二亲本杂交，筛选到接合子ＢＲ２，得到４．４ｋｂ与耐盐有关的ＤＮＡ片段。根据其物理图谱，酶切成６个ＤＮＡ片段，并分别连接到质粒ｐＵＣ１８进行测序。测序分析表明，该４．４ｋｂＤＮＡ片段含有ｆｉｘＯ、ｆｉｘＮ基因和３个开放阅读框（ＯＲＦ）。