食欲素A对人肝癌细胞Hep G2增殖和凋亡的影响及机制

目的研究食欲素A(orexin A)对人肝癌细胞Hep G2增殖和凋亡的影响,及其可能作用机制。方法以不同浓度的orexin A干预Hep G2细胞24h,MTT法检测细胞的增殖能力,筛选最适的orexin A作用浓度。使用食欲素受体1选择性拮抗剂SB408124(10μM)预处理细胞1 h,然后用最适浓度的orexin A干预细胞24h,实验设置为:正常对照组、溶剂对照组、orexin A组、SB408124+orexin A组。MTT法检测细胞的增殖情况,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡率,Hoechst染色观察细胞的形态变化,Western blot检测Bax、Bcl-2、Cytochrome c和Cleaved-caspase-3蛋白的表达。结果 Orexin A以剂量依赖性方式明显抑制Hep G2细胞的生长,最适宜浓度为0.5μM,细胞G0/G1期百分比(72.50%±1.32%)明显高于S期(19.6%9±1.15%)。Orexin A促进Hep G2细胞凋亡,细胞凋亡率显著升高(<0.01)。Orexin A显著上调Bax和Cleaved-caspase-3表达水平,下调Bcl-2和线粒体Cytochrome c表达水平。SB408124的干预能够减小orexin A对Hep G2细胞的影响。结论 Orexin A通过食欲素受体1抑制Hep G2细胞增殖并诱导其凋亡。