用CD133免疫磁珠分离脐血内皮祖细胞的实验研究

目的:从脐血中分离、培养血管内皮祖细胞,研究内皮祖细胞的生长特性和诱导分化条件。方法:应用MACS磁球抗体标记法纯化脐血中的CD133+细胞,通过流式细胞仪、免疫细胞化学、免疫荧光等技术及形态学(光镜、电镜)观察研究内皮祖细胞;将细胞接种于添加(或未添加)VEGF、bFGF、干细胞因子(SCF)的含20%胎牛血清(FBS)的IMDM培养基中,观察内皮祖细胞的生长特性。结果:分离新鲜脐血所得CD133阳性细胞占单个核细胞的(1.41±1.14)%,经流式细胞仪鉴定CD133+细胞纯度为75%-85%;将分离细胞接种于纤维连接蛋白包被的24孔板内,培养1-2h即有细胞贴壁,7-10d可见贴壁细胞呈铺路石样排列;14d后细胞出现小圆形、梭形等多样性变化,可见毛细血管管腔样结构,电镜观察可见胞浆内典型的Weibel-Palade小体;在VEGF、bFGF、SCF存在条件下,检测贴壁细胞培养14d后细胞表面抗原表达情况:与培养开始时相比,祖细胞标志CD133和CD34阳性率呈明显下降趋势,分别由(77.0±3.3)%和(93.1±4.7)%降至(1.6±2.2)%和(37.4±4.9)%,P<0.05,内皮细胞特异性标志Flk-1表达明显增加,由(22.3±3.3)%增至(94.3±4.1)%,P<0.05,同时vWF抗原呈强阳性表达,阳性率为(77.9±3.3)%。结论:根据细胞表面特异性分子标志(CD133+/CD34+/Flk-1+)可以从脐血中分离出EPCs,EPCs可在体外一定的诱导因子作用下,培养7-10d分化为成熟内皮细胞。