缺氧/复氧诱导培养人肥大心肌细胞凋亡模型的建立

目的　建立缺氧 /复氧诱导体外培养的人肥大心肌细胞模型并观察凋亡情况。方法　用 0 .2 %胰蛋白酶 (trypsin)和0 .1 %胶原酶 (collagenase)进行消化 ,用差速粘附贴壁法、Brdu加入和人为破坏成纤维细胞法纯化心肌细胞 ,用IMDM (Iscove′s改良的Dulbecco′smedium )培养基培养 ,4～ 6d后将体外培养的人肥大心肌细胞置于 92 %氮气及 5 %二氧化碳孵箱中 ,6、1 2、2 4、4 8h缺氧后再恢复正常条件培养 4h ,造成缺氧 /复氧损伤所致细胞凋亡模型 ,分别用倒置显微镜、电镜、TUNEL法技术检测凋亡发生的情况。结果　心肌细胞经历缺氧 /复氧损伤后 ,倒置显微镜、电镜、TUNEL染色均观察到凋亡阳性细胞。TUNEL法定量检测 ,心肌细胞缺氧培养 6、1 2、2 4、4 8h后复氧 4h ,其凋亡率分别为 :(4 .5± 1 .5 ) %、(1 0 .1± 2 .0 ) %、(1 7.3± 2 .3) %和 (1 8.4± 1 .9) %。结论　缺氧 /复氧一定时间可以诱导体外培养的人肥大心肌细胞凋亡 ,心肌细胞凋亡率随着缺氧时间的延长而增高