凡纳滨对虾蛋白酶的分离纯化及生化特性

采用Tris-HCl缓冲液抽提、Sephadex G-100凝胶过滤层析、DEAE-Sepharose F.F.阴离子交换层析和SDS-PAGE等方法,分离和纯化了凡纳滨对虾蛋白酶,研究了其生化特性。试验结果表明,该蛋白酶粗提物经层析后,得到聚丙烯酰胺凝胶电泳纯的一酶组分。该蛋白酶的比活力从128.35 U/mg增至1835.65 U/mg,提高了14.3倍,产率达31.9%。SDS-PAGE显示该蛋白酶只含一条谱带,相对分子量为25 kD。以酪蛋白为底物,该酶的最适pH为7.0,最适温度为60℃,在50℃以下,比较稳定,放置1 h后活性仍超过60%,而超过50℃时蛋白酶活性急剧下降,60℃放置1 h后,酶活性只残留4.7%。10 mmol/L EDTA、Fe2+、Ba2+和Zn2+对该蛋白酶有较强的抑制作用,抑制率分别为84%、53%、43%和38%,10 mmol/L Mg2+和Cu2+对蛋白酶活性有轻微抑制作用,而10 mmol/L Ca2+能显著促进蛋白酶活性,据此推测凡纳滨对虾蛋白酶可能为一种金属蛋白酶。