糖基化终末产物对牛视网膜微血管内皮细胞和周细胞存活和形态的影响

目的观察体外孵育的牛血清白蛋白(BSA)非酶促糖基化终末产物(AGEs)对牛视网膜微血管内皮细胞(BREC)和周细胞(BRP)存活和形态的影响。方法取终浓度为50mg/ml的牛血清白蛋白(BSA)、500mmol/LD-葡萄糖,于37℃孵箱内避光孵育12周,制备外源性AGEs-BSA,经SephacrylS-300层析纯化,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)蛋白电泳鉴定AGEs-BSA和coomassie蛋白质定量法测定蛋白浓度。分设不同浓度梯度的AGEs-BSA实验组和BSA对照组,以及空白对照组,分别观察体外孵育的AGEs-BSA对体外培养的BREC和BRP的毒性作用。相差倒置显微镜观察500μg/mlAGEs-BSA和BSA作用48h对BREC和BRP形态的影响。结果随着AGEs-BSA剂量的增加,细胞被抑制呈上升趋势。500μg/mlAGEs-BSA抑制BREC为空白对照组的(72.8±15.9)%,抑制周细胞为空白对照组的(64.8±9.0)%。低浓度AGEs-BSA对BREC有一定促增生作用,但与空白对照组比较无统计学意义(P=0.231)。相差倒置显微镜观察结果显示AGEs-BSA处理组细胞增殖受抑制,失去正常细胞形态,而BSA对照组细胞同空白对照组,细胞形态正常。结论AGEs-BSA在高浓度时,无论是对BREC还是BRP,都产生生长抑制作用,从而导致BRP的丢失,损伤血管功能。进一步证实了非酶糖化是糖尿病微血管并发症的一个重要原因。