Ki-67启动子的克隆及其转录活性

被引：7

作者：

孙方浩 ^{[1
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郑骏年 ^{[1
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徐为 ^{[3
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刘晓昀 ^{[1
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张宝福 ^{[1
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宋文哲 ^{[3
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刘俊杰 ^{[3
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章龙珍 ^{[3
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顾玉明 ^{[3
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高超 ^{[3
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李望 ^{[1
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裴冬生 ^{[1
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机构：

[1] 江苏徐州医学院肿瘤生物治疗实验室

[2] 徐州市第一人民医院泌尿外科

[3] 徐州医学院附属医院肿瘤中心

来源：

中华实验外科杂志 | 2009年 / 01期

关键词：

Ki-67基因; 肿瘤; 启动子; 基因治疗;

D O I：

暂无

中图分类号：

Q78 [基因工程（遗传工程）];

学科分类号：

071007 [遗传学];

摘要：

目的克隆肿瘤特异Ki-67启动子,观察其在人肿瘤细胞中的转录活性。方法提取肾癌Ketr-3细胞基因组总DNA作为模板,聚合酶链反应(PCR)获取1.6 kb的Ki-67启动子DNA片段。克隆到pGL3-Basic载体构建双荧光素酶检测质粒pGLB-Ki-67。将pGLB-Ki-67转染4种人肿瘤细胞及人脐静脉内皮Huvec细胞,使用双荧光素酶检测系统鉴定启动子活性及肿瘤特异性。结果电泳与测序结果显示克隆出的Ki-67启动子片段序列与Genbank中记录一致,pGLB-Ki-67质粒构建成功。其启动子活性在Hela、BIU-87、Ketr-3、A549 4种人肿瘤细胞内分别达到SV40 promoter/enhancer活性的21.0%、31.1%、23.9%和7.2%;在Huvec细胞内仅为0.5%。结论克隆出Ki-67基因启动子(-820～+771),并证明其具有良好转录活性。

引用