一种高效可直接用于PCR分析的土壤总微生物DNA抽提方法

被引：27

作者：

李钧敏

金则新

机构：

[1] 台州学院生态研究所

来源：

应用生态学报 | 2006年 / 11期

基金：

浙江省自然科学基金;

关键词：

土壤总微生物; DNA; 抽提; PCR扩增;

D O I：

10.13287/j.1001-9332.2006.0415

中图分类号：

S154.3 [土壤微生物学];

学科分类号：

071012 ; 0713 ;

摘要：

以CTAB-溶菌酶-蛋白酶K-冻融裂解法直接抽提土壤总微生物的基因组DNA,利用PEG8000沉淀和纯化DNA.结果表明,该方法是一种简便、有效可直接应用于PCR分析的土壤总微生物基因组DNA的抽提方法.采用含聚乙烯吡咯烷酮(PVP)的缓冲液预洗,添加CaCl2和BSA,可以去除腐殖酸;用PEG8000沉淀DNA,可以提高DNA质量;采用冻融法破碎细胞,CTAB、溶菌酶和蛋白质酶K共同作用以裂解细胞,可以保证获得大片段的DNA,提高DNA产率.用该方法抽提的七子花林下土壤总微生物DNA产率为9·22μg·g-1,A260/A280为1·65,可适用于PCR扩增及扩增rDNA限制酶切分析(ARDRA)技术,适宜的模板DNA浓度为0·67ng·μl-1.快速、有效、可直接用于PCR分析的土壤总微生物DNA提取方法的建立,为大规模的土壤微生物分子生态学研究提供了可能.

引用

页码：2107 / 2111

页数：5

共 8 条

[1] 用于分子生态学研究的土壤微生物DNA提取方法 [J].