溶藻弧菌外膜蛋白OmpK基因表达和间接ELISA检测方法的初步建立

被引：10

作者：

李明云

丁文超

陈炯

史雨红

机构：

[1] 宁波大学教育部应用海洋生物技术重点实验室

来源：

水产学报 | 2010年 / 34卷 / 10期

关键词：

溶藻弧菌; OmpK基因; 原核表达; 间接酶联免疫吸附法;

D O I：

暂无

中图分类号：

S941 [鱼病学];

学科分类号：

0906 ;

摘要：

溶藻弧菌是中国南部水产养殖业中弧菌病的最主要病原菌,数量居海洋类弧菌之首,其快速检测具有重要意义。以溶藻弧菌国内标准株ATCC17749基因组DNA为模板,PCR扩增出外膜蛋白OmpK基因,将其克隆入表达载体pET-28a中,获得重组质粒pET-28a-OmpK,限制性内切酶结合琼脂糖凝胶电泳分析和序列测定结果表明,该序列开放读码框正确且与已发表的OmpK结构编码序列完全一致。将重组质粒pET-28a-OmpK转化大肠杆菌BL21pLysE,高效表达重组蛋白,将其纯化后免疫小鼠所得的高免血清能外膜蛋白OmpK特异性结合,表明体外表达的重组蛋白OmpK具有良好的免疫原性和反应原性。利用该抗溶藻弧菌外膜蛋白OmpK的抗血清建立了间接ELISA检测方法,检测灵敏度为104CFU/mL,能特异性检测出溶藻弧菌,与其他菌株无交叉反应。

引用

页码：1559 / 1565

页数：7

共 18 条

[1] Genetic heterogeneity among Vibrio alginolyticus isolated from shrimp farms by PCR fingerprinting [J].