单链抗体2F3表达条件的优化及其提纯和性质研究

被引：5

作者：

罗元明

牟颖

魏景艳

阎岗林

罗贵民

机构：

[1] 吉林大学分子酶学工程教育部重点实验室

[2] 吉林大学分子酶学工程教育部重点实验室长春

[3] 长春

来源：

生物工程学报 | 2002年 / 01期

关键词：

单链抗体; 包涵体; Western blotting; ELISA; 抗体酶;

D O I：

10.13345/j.cjb.2002.01.018

中图分类号：

Q813.2 [细胞融合工程];

学科分类号：

0836 ; 090102 ;

摘要：

将构建好的单链抗体 2F3表达载体pTMF2F3ScFv转化到大肠杆菌BL2 1(DE3)。先挑选出表达量高的单克隆 ,然后让其在 37℃进行表达 ,并将表达时的培养条件进行优化。实验结果表明 :最佳诱导条件为开始诱导时的菌体密度OD590nm =1.0～ 1.8,所加异丙基 β D 硫代半乳糖苷 (IPTG)的浓度为 0 3～ 0 5mmol L ,诱导时间 7h ,优化后目的蛋白表达量占菌体总蛋白的 2 0 % ,并用发酵罐成功地进行了扩大培养 ,筛选了洗涤包涵体的最佳条件。采用两步法对包涵体复性进行了研究 ,用Westernblotting及ELISA法检测了所表达的单链抗体及其生物活性 ,并成功制备了含硒单链抗体酶

引用

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