芦荟过氧化氢酶的分离纯化和性质研究

目的:获得库拉索芦荟过氧化氢酶纯品并对其性质进行研究。方法:采用硫酸铵分级沉淀,DEAE-Sepharose阴离子交换层析,CM-Sepharose阳离子交换层析和SephacrylS-200凝胶层析对酶蛋白进行分离纯化,采用SDS-PAGE鉴定酶的纯度、分子质量。结果:从芦荟中分离纯化获得电泳纯的过氧化氢酶,纯化倍数为228.05倍,酶活力回收率为14.10%,比活力达17427.30U/mg。该酶的分子质量为239.90kD,亚基分子质量为60.60kD。推测该酶由4个相同亚基构成。该酶最适温度为45℃,最适pH值为7.5,以过氧化氢为底物测定该酶的表观Km为34mmol/L。结论:成功分离纯化获得过氧化氢酶,该酶具有良好的热稳定性和酸碱耐受性。