亲和层析法分离纯化蒜氨酸酶

被引：14

作者：

吴熙然 ^{[1
,2
]}

胡红华 ^{[1
,2
]}

张相年 ^{[2
]}

赵树进 ^{[2
]}

机构：

[1] 华南理工大学生物科学与工程学院

[2] 广州军区广州总医院

来源：

食品科学 | 2009年 / 19期

关键词：

蒜氨酸酶; 分离纯化; 亲和层析; S烷基-L-半胱氨基;

D O I：

暂无

中图分类号：

TS201.25 [];

学科分类号：

摘要：

目的:以蒜氨酸酶竞争性抑制剂S-烷基-L-半胱氨酸为配基,制备亲和层析胶分离纯化蒜氨酸酶。方法:以1,4-丁二醇二缩水甘油醚为活化剂,在碱性条件下,活化载体SepharoseCL-4B,偶联半胱氨酸,作为蒜氨酸酶的亲和层析胶。低温粉碎大蒜所得的大蒜液,经25%PEG-5000沉淀,得到粗酶。用制得的亲和胶分离纯化,并利用SDS-PAGE对酶纯度进行检验。结果:大蒜液用25%PEG-5000沉淀可以较简便地分离出粗酶,经制得的亲和胶层析,活力回收达到68.42%,比活力为9.493U/mg,纯化倍数达到22.17倍。提纯的蒜氨酸酶为电泳纯,亚基约为52kD。纯酶的最适温度为35℃,最适pH值为6.23,Km=9.845mmol/L,Vmax=24.93U/mg。结论:以S-烷基-L-半胱氨酸为配基制得了适合于蒜氨酸酶分离纯化的亲和载体。

引用

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