多重PCR法检测鲜切哈密瓜中3种食源性致病菌

被引：13

作者：

冯可 ^{[1
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胡文忠 ^{[2
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姜爱丽 ^{[2
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萨仁高娃 ^{[1
,2
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徐永平 ^{[1
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杨柳 ^{[2
]}

王馨 ^{[2
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机构：

[1] 大连理工大学生命科学与技术学院

[2] 大连民族大学生命科学学院

来源：

食品科学 | 2017年 / 38卷 / 06期

基金：

国家重点研发计划;

关键词：

多重PCR; 快速检测; 食源性致病菌; 鲜切哈密瓜;

D O I：

暂无

中图分类号：

TS255.7 [果蔬加工品标准与检验];

学科分类号：

摘要：

建立可同时检测鲜切哈密瓜中的单增李斯特菌、鼠伤寒沙门氏菌和大肠杆菌O157:H7的多重聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测方法。根据单增李斯特菌inl A基因、鼠伤寒沙门氏菌inv A基因、大肠杆菌O157:H7的wzy基因设计3对特异性引物。对多重PCR反应体系中的引物浓度、退火温度、Mg2+浓度、d NTP浓度进行了优化,并确定适宜的多重PCR反应体系及反应条件。结果表明:25μL反应体系,10×PCR buffer为2.5μL,Mg Cl2(25 mmol/L)为3.5μL,d NTPs(2.5 mmol/L)为2μL,inl A基因上下游引物(5μmol/L)为1μL,inv A基因上下游引物(5μmol/L)为1μL,wzy基因上下游引物(5μmol/L)为2μL,单增李斯特菌DNA模板为1μL,鼠伤寒沙门氏菌DNA模板为1μL,大肠杆菌O157:H7 DNA模板为1μL,ex Taq DNA聚合酶(5 U/L)为0.3μL,加dd H2O补足25μL。反应条件为95℃预变性3 min;94℃变性30 s,53.9℃退火30 s,72℃延伸30 s,32个循环;72℃延伸10 min。鲜切哈密瓜中人工接种的目标菌的灵敏度为单增李斯特菌2.7×104 CFU/g,大肠杆菌O157:H7 3.3×104 CFU/g以及鼠伤寒沙门氏菌3.8×104 CFU/g。该技术可为快速检测鲜切哈密瓜中病原菌污染度及其控制提供参考依据。

引用

页码：295 / 302

页数：8

共 25 条

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