荧光定量RT-PCR法检测运输应激猪热休克蛋白mRNA转录水平

被引：22

作者：

李玉保 ^{[1
]}

鲍恩东 ^{[1
]}

王志亮 ^{[2
]}

赵茹茜 ^{[1
]}

机构：

[1] 南京农业大学农业部动物生理生化重点开放实验室

[2] 农业部动物检疫所

来源：

中国农业科学 | 2006年 / 01期

关键词：

猪; 热休克蛋白; SYBRGreenI; 荧光定量PCR; 运输应激;

D O I：

暂无

中图分类号：

S852.2 [家畜生理学、生物物理学、生物化学];

学科分类号：

090601 ;

摘要：

目的探讨应激时热休克蛋白mRNA转录水平的变化。方法根据HSP90、HSP70和GAPDHmRNA序列,设计并合成引物,将PCR扩增的基因片段克隆到pGEM-T载体,重组质粒经筛选、鉴定,体外转录出RNA,梯度稀释作为阳性模板,用于标准曲线的制定和样品检测,建立了一步法实时荧光定量RT-PCR技术平台,并用于检测长途运输猪心脏和肝脏中HSP70及HSP90mRNA转录水平的改变。结果经1、2、4、6和10h的运输应激后,组织中HSP70mRNA的转录水平随着运输应激时间的延长一直呈现出上升的趋势,运输应激到10h时HSP70mRNA的转录水平升到最高,肝脏和心脏组织中HSP70mRNA的转录水平分别为对照组的2.5和4.1倍;HSP90mRNA的转录水平则随着运输应激时间的延长呈下降趋势。结论运输应激可以影响HSPmRNA转录水平的变化,并且对不同家族的HSPmRNA转录水平的影响不同;HSP70mRNA的转录水平有望成为猪运输应激的判定指标之一。

引用

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