以鲁斯可皂苷元为配基的亲和层析柱的制备及其在纯化抗体中的应用

目的:以鲁斯可皂苷元(ruscogenin,RUS)为配基制备亲和层析柱,并应用于免疫亲和纯化抗血清。方法:将鲁斯可皂苷元衍生为带有两个-COOH臂的丁二酸单酯衍生物(succinylatedruscogenin,RUS-2HS),与带有10碳原子链的琼脂糖凝胶EAHSepharose4B偶联,制成亲和层析柱;以制备的亲和层析柱纯化人工合成抗原RUS-2HS-BSA(牛血清白蛋白)免疫家兔产生的抗血清,得到特异性较高的抗体,并检测纯化抗体的纯度及特异性。结果:成功将RUS-2HS作为配体偶联至亲和介质上,偶联量为4.24mg.mL-1,偶联率为53.25%;竞争性抑制试验显示纯化抗体交叉反应率下降,特异性提高;SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)显示单一蛋白质条带,其相对分子质量约为51.2kD。结论:建立了以小分子天然活性产物为配基制备亲和柱的方法,应用于抗血清的纯化,获得的特异性抗体为探索该类难检测的活性成分的药理作用机制提供新的技术手段。