痛泻要方调控慢性应激下结肠癌NKG2DL表达促进NK细胞抗肿瘤免疫效应及机制

目的：探讨痛泻要方对慢性应激下肿瘤相关自然杀伤（NK）细胞功能的影响及其可能的分子机制。方法：将50只SPF级BABL/C雄性小鼠，随机分成正常组、模型组、痛泻要方低、中、高剂量组，每组10只。除空白组，其余各组进行慢性束缚应激干预7 d，进行强迫游泳及悬尾实验行为学检测来评价造模是否成功，成功后痛泻要方组分别给予痛泻要方低、中、高剂量（6.825、13.65、27.3 g·kg-1）灌胃，其余组予生理盐水灌胃，14 d后对每组小鼠进行结肠癌皮下瘤接种，构建慢性应激结肠癌小鼠模型。采用苏木素-伊红（HE）染色观察各组小鼠肿瘤组织病理形态变化；采用流式细胞术检测小鼠外周血及瘤体组织中CD49b阳性细胞的含量；采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测小鼠外周血中NK细胞活化相关分子的含量；采用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测小鼠瘤体组织中主要组织相容性复合物Ⅰ类多肽相关序列A和B(MICA+MICB)、UL-16结合蛋白1(ULBP1)蛋白表达。结果：与正常组比较，模型组血清中5-羟色胺（5-HT）含量降低及皮质酮（CORT）含量升高（P<0.05）；与模型组比较，痛泻要方各组5-HT含量上升、CORT含量下降（P<0.05,P<0.01）。与正常组比较，模型组瘤体体积、质量增大（P<0.05）；与模型组比较，痛泻要方各组瘤体体积降低，但差异无统计学意义。与正常组比较，模型组肿瘤细胞排列紧密、不规则，大小不均，异型性明显，多见核分裂，坏死面积较小，且肿瘤细胞及周围血管丰富。与模型组比较，痛泻要方各组肿瘤细胞排列稀疏，肿瘤组织内有不同程度的片状坏死区，坏死部分可见核碎裂、溶解和核碎屑。与正常组比较，模型组外周血及瘤体组织中CD49b阳性细胞数显著降低（P<0.01）；与模型组比较，痛泻要方中剂量组上升（P<0.01）；痛泻要方高剂量组明显上升（P<0.05,P<0.01）。与正常组比较，模型组血清中颗粒酶-B(Gzms-B)、穿孔素（PF）、γ干扰素（IFN-γ）、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量均明显降低（P<0.05,P<0.01）；与模型组比较，痛泻要方低剂量组PF、Gzms-B、TNF-α含量上升（P<0.05,P<0.01），痛泻要方中剂量组Gzms-B、PF、IFN-γ、TNF-α含量明显上升（P<0.05,P<0.01），痛泻要方高剂量组PF、IFN-γ、TNF-α含量显著上升（P<0.01）。与正常组比较，模型组中ULBP1蛋白表达量明显下降（P<0.05）；与模型组比较，痛泻要方低、中、高剂量组中ULBP1蛋白表达量明显上升（P<0.05,P<0.01），痛泻要方中、高剂量组MICA+MICB蛋白表达量明显上升（P<0.05,P<0.01）。结论：痛泻要方可能通过上调NKG2DL中MICA+MICB及ULBP1表达促进NK细胞活化及功能发挥，阻延慢性应激下结肠癌进展。