痛泻要方调节T淋巴细胞亚群改善慢性应激下大肠癌免疫微环境的机制

目的：探讨痛泻要方对慢性应激下小鼠大肠癌免疫微环境的影响及可能的作用机制。方法：取SPF级BABL/C雄性小鼠40只，随机分成正常组、应激组、痛泻要方组(13.65 g·kg-1)、痛泻要方应激组(13.65 g·kg-1)，每组10只。采用慢性束缚应激方法构建应激性小鼠模型，应激7 d后治疗组给予痛泻要方灌胃，在第14天通过强迫游泳实验和悬尾实验检测痛泻要方对应激后小鼠的行为学改变情况，同时对各组小鼠进行大肠癌皮下瘤种植。观察痛泻要方对小鼠体质量、肿瘤体积的影响；末次给药后，收集小鼠血清、瘤体样本。用免疫组化、流式细胞术检测瘤体内T淋巴细胞亚群(CD3+、CD4+、CD8+及CD4+/CD8+)含量变化；用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测小鼠外周血中皮质酮(CORT)、血清白细胞介素(IL)-2、γ干扰素(IFN-γ)、IL-6和IL-10含量；并用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测小鼠核转录因子-κB(NF-κB)抑制蛋白(IκB)激酶α/β(IKKα/β)、NF-κB抑制蛋白α(IκBα)、NF-κB p65、磷酸化(p)-NF-κB p65蛋白表达。结果：与正常组比较，应激组小鼠瘤体体积增大(P<0.05);CD3+、CD4+、CD4+/CD8+数量下降(P<0.05,P<0.01);CD8+数量有上升趋势；辅助性T细胞1(Th1)细胞因子IFN-γ含量降低(P<0.05)；辅助性T细胞2(Th2)细胞因子IL-10含量升高(P<0.05);CORT含量升高(P<0.05);p-NF-κB p65、NF-κB p65蛋白表达升高，但差异无统计学意义；IKKα/β蛋白表达升高(P<0.05);IκBα蛋白表达明显下降(P<0.05)。与正常组比较，痛泻要方组瘤体生长速度下降，但差异无统计学意义；CD3+、CD4+、CD4+/CD8+数量显著上升(P<0.01);CD8+数量下降(P<0.05);Th1细胞因子IL-2、IFN-γ含量升高(P<0.05);Th2细胞因子IL-6、IL-10含量降低(P<0.05);CORT含量降低，但差异无统计学意义；p-NF-κB p65蛋白表达下降，但差异无统计学意义；NF-κB p65、IKKα/β蛋白表达明显下降(P<0.05);IκBα蛋白表达显著升高(P<0.01)。与应激组比较，痛泻要方应激组瘤体生长速度下降，但差异无统计学意义；CD3+、CD4+、CD4+/CD8+数量上升(P<0.01);CD8+数量下降(P<0.05);Th1细胞因子IL-2、IFN-γ含量升高(P<0.05);Th2细胞因子IL-6、IL-10含量降低(P<0.05);CORT含量降低(P<0.05);p-NF-κB p65、NF-κB p65、IKKα/β蛋白表达明显下降(P<0.05,P<0.01),IκBα蛋白表达显著升高(P<0.01)。结论：痛泻要方可阻延慢性应激下大肠癌生长，有效改善大肠癌免疫微环境的恶化，其作用机制可能与抑制NF-κB信号通路，调节T淋巴细胞亚群功能，从而抑制促炎因子分泌有关。