四逆散改善Mdr2-/-小鼠胆汁淤积性肝纤维化作用

目的 研究四逆散对Mdr2（Abcb4）基因缺陷(Mdr2-/-)小鼠胆汁淤积性肝纤维化的缓解作用，并探究其作用机制。方法 C57BL/6J小鼠作为对照组；C57BL/6J背景的Mdr2-/-小鼠作为模型小鼠，设模型组和四逆散低、高剂量(按生药量计为3.12、6.24 g·kg-1)组。四逆散组连续3周ig给予四逆散水提物，每天1次，对照组给予纯水。试剂盒法检测血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）、总胆汁酸水平；取肝脏、脾脏称质量，计算肝脏、脾脏系数；结合小鼠肝组织HE染色，Masson染色，纤连蛋白（Fibronectin）、细胞角蛋白19（CK19）的免疫组化染色，明确四逆散对Mdr2-/-小鼠肝纤维化及胆汁淤积的影响。基于小鼠肝脏转录组学测序技术，挖掘四逆散改善Mdr2-/-小鼠肝损伤的作用靶点，并通过实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测肝纤维化[fibronectin（Fn1）、胶原蛋白1（Col1a1）、角蛋白19（krt19）]、炎症[白细胞介素-1β（Il1β）、Il6、肿瘤坏死因子-α（Tnfα）、一氧化氮合成酶（Inos）]、细胞焦亡[凋亡相关斑点样蛋白（Pycard）、Il18]、胆汁酸合成[细胞色素P450家族成员7A1（Cyp7a1）]及转运[胆盐输出泵（Abcb11）、ATP结合盒转运蛋白（Abcc3）、钠离子-牛磺胆酸共转运蛋白（Slc10a1）]相关基因的转录水平。结果 与模型组比较，四逆散高剂量显著降低血清总胆汁酸的水平（P<0.05）；明显缓解了Mdr2-/-小鼠肝脏中央静脉及胆管周围炎性细胞的浸润和胶原纤维的沉积，并显著抑制胆管反应的发生。转录组学及qRT-PCR结果共同表明，四逆散下调Mdr2-/-小鼠肝脏纤维化、炎症、细胞焦亡相关基因的转录（P<0.05）；同时，四逆散下调胆汁酸合成关键限速酶调控基因Cyp7a1和调控胆汁酸向肝内转运的基因Slc10a1的转录，并上调调控胆汁酸外排的基因Abcb11、Abcc3的转录。结论 四逆散能缓解Mdr2-/-小鼠胆汁淤积性肝纤维化，机制可能与其调控炎症反应、细胞焦亡以及胆汁酸的合成和转运有关。