酸枣仁皂苷A生物吸收的细胞学机制

目的 通过试验观察人结肠癌细胞（the human colon carcinoma cell line，Caco-2）对酸枣仁皂苷A（Jujuboside A，JuA）摄取与转运过程，探明JuA在Caco-2细胞模型中的吸收特性，为深入研究JuA的药理学作用机制提供理论和试验依据。 方法 ① 建立并采用高效液相（High Pressure Liquid Chromatography，HPLC）方法检测JuA的浓度，评价Caco-2细胞吸收JuA的能力。 ② 建立与评估Caco-2细胞模型，由于Caco-2细胞来源和培养条件差异，不同克隆Caco-2细胞之间增殖和生化特性不尽相同。即使在相同的培养条件下，细胞模型的某些生物物理和生化特征也会有一定的差异，所以各实验间的数据只具参考价值，不可直接套用。因此本实验室在Caco-2细胞模型建立之初对一些参数如光镜检查，电镜检查，跨上皮细胞电阻（transepithelial elect rical resistance，TEER），葡聚糖的通透性等指标进行测定，以确证单层Caco-2细胞模型的特异性。 ③ 通过MTT法了解不同浓度的JuA对Caco-2细胞的毒性作用。 ④ 绘制培养时间-细胞药物摄取量曲线，考察时间对Caco-2细胞摄取JuA的影响，并同时考察pH、浓度及温度对Caco-2细胞摄取JuA的影响。 ⑤ 研究P-糖蛋白（P-glycoprotein，P-gp）抑制剂维拉帕米（Verapamil，Ver）及代谢抑制剂叠氮化钠（Sodium azide），2，4-二硝基酚（2，4-Dinitrophenol）对Caco-2细胞摄取JuA的影响，探讨JuA的吸收机制。 ⑥ Caco-2细胞在Transwell上培养21天后，分别在顶侧（Apical，AP）和基底侧（Basolateral，BL）加入100μg·ml-1的JuA，通过表观通透系数（Apparent permeability coefficient，Papp）的测定来探导JuA的转运机制。