口服透明质酸对实验性小鼠骨关节炎的作用及其药物动力学的初步探讨

目的 骨关节炎（Osteoarthritis,OA）发病率高,防治难,是世界范围内的重要公共卫生问题。透明质酸（Hyaluronic acid,HA）是构成软骨基质和维持关节功能的重要物质。本文结合国内外最新研究,就口服透明质酸对OA中的防治及其吸收形式进行了以下四个方面的实验: （1）建立冷水诱导的小鼠OA模型; （2）观察口服HA对冷水刺激下小鼠发生OA的预防作用; （3）观察口服HA对OA小鼠的治疗作用; （4）初步探讨HA在OA小鼠中的药物动力学。 方法 针对以上四个方面的研究,研究方法如下: （1）选用清洁级BALB/C小鼠20只适应性饲养5d后随机分为空白组和模型组,每组各10只。给予模型组小鼠右膝关节6℃～8℃冷水刺激,观察体重变化情况。30d后用游标卡尺测量关节直径,用ELISA法测定小鼠血清肿瘤坏死因子（TNF-a）、类风湿因子（IgM）及透明质酸（HA）的含量,并取膝关节行HE染色制作病理切片。 （2）将50只BALB/C小鼠随机分为空白组、模型组、低、中、高剂量HA干预组,按上述方法建立小鼠OA模型的同时,从预防角度给予口服不同剂量的透明质酸,采用膝关节肿胀度、血清学指标及病理学切片评价口服透明质酸从预防角度干预OA的作用效果。 （3）将48只BALB/C小鼠称重后随机分为空白组、模型组、低、中、高剂量HA干预组和阳性药物组,按上述冷水刺激方法建立小鼠OA模型后,给予口服不同剂量的透明质酸和阳性药物,采用膝关节肿胀度、血清学指标及病理学切片评价口服透明质酸干预后的治疗效果。 （4）将90只BALB/C小鼠称重后,随机分为NS对照组和HA处理组两组,按上述实验方每天给予冷水刺激,建立实验性小鼠OA模型。刺激结束后次日,分别给予OA小鼠口服0.9%NS,HA。在给药后0、0.5、1、1.5、2、4、8、12、24h时间点随机各取5只,处死后测量血清HA水平,探讨HA口服后的药物动力学。 结果 （1）模型组小鼠与空白组小鼠相比,右膝关节直径差异有统计学意义（P <0.01）;血清TNF-a和HA水平升高,差异有统计学意义（P <0.01）,血清IgM的水平无变化（P >0.05）。模型组膝关节切片出现软骨及滑膜细胞排列紊乱,核溶或消失,有明显软骨及滑膜细胞增生、钙化、粘连,及关节腔间隙变窄等骨关节炎病理改变。 （2）从预防角度干预OA小鼠模型后,实验周期结束时,各干预组小鼠骨关节红肿程度减轻（P<0.01）,血清中TNF-а、HA、MDA、T-SOD水平均低于模型组（P<0.05）,以中、高剂量HA组效果较好,中、高剂量干预组病理切片仍有骨关节炎病理改变,但病理改变程度轻于模型组。 （3）经治疗后,各干预组小鼠骨关节红肿程度减轻（P<0.01）,血清中TNF-а、HA、MDA、T-SOD水平均低于模型组（P<0.05）,以中、高剂量HA组效果较好,治疗组病理切片出现软骨及滑膜细胞分布密度改变,细胞紊乱,及增生、变性粘连等骨关节炎病理特点,但与模型组相比病理改变差异尚不明显。 （4）实验性OA小鼠口服HA后,在1.5h左右处出现吸收峰,8h左右处出现合成峰,AUC0-24h为1027ug·h/L;NS对照组血清HA曲线变化无规律性,未出现吸收峰。 结论 （1）冷水刺激可诱发小鼠骨关节炎,小鼠骨关节炎模型建立成功。 （2）口服HA对实验性小鼠骨关节炎具有预防效果,能够改善OA症状及血清学水平,并能延缓OA病理进程。 （3）口服HA对实验性小鼠骨关节炎具有治疗效果,能减轻关节红肿症状及部分血清学指标,但病理切片改善程度尚不明显。 （4）OA小鼠口服HA后,其血药浓度出现双峰,AUC0-24h为1027μg·h/L。