葛根芩连汤抗病毒有效物质基础研究

硕士生：龚湛文 导 师：石任兵 教授 （北京中医药大学 中药学院， 北京 100102） 葛根芩连汤见于《伤寒论》34条:“太阳病,桂枝证,医反下之,利遂不止,脉促者,表未解也;喘而汗出者,葛根黄芩黄连汤主之。”本方由葛根、黄芩、黄连、甘草组成,具有轻清解肌、清热止利功效,用于治疗太阳表邪内陷所致肠热下利证。葛根芩连汤是中医治疗病毒性肠炎的著名经方。 本论文分三部分开展对葛根芩连汤抗病毒有效物质基础研究。 第一部分 葛根芩连汤的文献综述研究。包括对全方及其单味药的化学，药理学及药剂学方面的研究综述，共引用文献205篇。 第二部分 葛根芩连汤抗病毒有效物质基础研究。 对葛根芩连汤抗病毒有效部位进行提取、分离，得到9个单体化合物，运用1HNMR、13CNMR等光谱技术和化学方法鉴定了其中的6个。其中黄酮及黄酮苷4个，分别为葛根素、黄芩苷、汉黄芩素、异甘草素；生物碱2个，为小檗碱和药根碱。此6个化合物均为首次从葛根芩连汤中得到。通过HPLC特征图谱研究，采用对照品添加法和与对照品保留值对照的方法确认了葛根芩连汤抗病毒有效部位的另外8个主要成分：大豆素；3＇-甲氧基葛根素； 4＇，7-二葡萄糖大豆素；巴马汀；甘草酸；甘草苷；异甘草苷；甘草素。经文献检索知，葛根素、大豆素、3＇-甲氧基葛根素、 4＇，7-二葡萄糖大豆素来源于葛根，黄芩苷和汉黄芩素来源于黄芩，小檗碱、药根碱、巴马汀来源于黄连，甘草酸、甘草苷、异甘草苷、甘草素、异甘草素来源于甘草。 建立了葛根芩连汤抗病毒有效部位的HPLC特征图谱，通过分析比较发现样品中 34个共有的指纹色谱峰。通过与单味药葛根、黄芩、黄连、甘草及阴性相应部位的HPLC图谱的比较，基本确认了各峰的归属。通过添加对照品及与对照品保留值对照的方法确认了14个指纹峰: 峰1为4＇，7-二葡萄糖大豆素； 峰3 为葛根素；峰4为3＇-甲氧基葛根素；峰12 为甘草苷；峰14为黄芩苷；峰25 （360nm）为异甘草苷；峰26 为大豆素；峰27 为甘草素；峰28 为药根碱；峰29 为甘草酸；峰30 为巴马汀；峰32 （270nm）为小檗碱；峰32（360nm）为异甘草素；峰33 为汉黄芩素。 对葛根芩连汤抗病毒有效部位中总生物碱和总黄酮进行了定量分析。结果表明，总生物碱在稀醇洗脱部分的平均含量为6.45%，RSD=1.811%；在沉淀部分的平均含量为15.87%，RSD=0.386%；计算得全方有效部位中总生物碱含量为12.61%。总黄酮在稀醇洗脱部分的平均含量为26.47%，RSD=0.50%；在沉淀部分的平均含量为29.99%，RSD=1.05%；平均加样回收率为102.0%，RSD为2.75%（n=5）；计算得全方有效部位中总黄酮含量为28.77%；经对单味药的贡献考察得出，黄芩为17.19%，甘草为6.77%，葛根为4.81%。 建立了葛根芩连汤抗病毒有效部位中指标性成分黄芩苷、葛根素等的定量分析方法。实验结果表明，黄芩苷的线性范围为0.26-2.08μg，相关系数0.9997 ;稀醇洗脱部分平均含量为4.87%(n=3);沉淀部分的平均含量为10.73%(n=3);平均加样回收率98.61%，RSD=2.77%(n=5)；计算得全方有效部位中黄芩苷含量为8.70%。葛根素的线性范围为0.5-4.0μg，相关系数0.9998;稀醇洗脱部分平均含量为11.47%(n=3) ;沉淀部分的平均含量为4.70%(n=3);平均价样回收率102.4%，RSD=2.70%(n=5)；计算得全方有效部位中葛根素含量为7.04%。 第三部分 对实验结果进行综合分析讨论。