铁皮石斛多糖结构及抗氧化性初步研究

铁皮石斛是我国名贵的中药材,具有非常高的药用价值,而多糖是铁皮石斛中最主要的药用成分,铁皮石斛多糖结构及功能性的研究,将对铁皮石斛发挥养生保健作用具有重要的意义。本文以铁皮石斛为材料,对铁皮石斛多糖提取方法进行了优化,并且分离纯化得到了单一组分的纯多糖DOP,初步研究了多糖DOP的结构以及抗氧化活性。 采用响应面优化法对铁皮石斛多糖的提取工艺进行优化,选取提取温度、提取时间、提取次数和料液比四个条件进行单因素试验,将其中影响较大的3个因素(提取温度、提取时间、料液比)利用Box-Benhnken中心组合法设计试验,分析获得最佳提取条件,结果表明：在确定提取次数为2次时,最佳提取条件为料液比1：43,提取时间2h,提取温度80℃。在此条件下,实际平均提取率为18.35%,与理论值比,相对误差为0.9%。 分离纯化及结构初步鉴定试验,将铁皮石斛粗多糖经DEAE-52纤维素柱分离得到了四个多糖组分(DO-1、DO-2、DO-3、DO-4),并将组分DO-1经Sephadex G-200柱纯化得到多糖DOP。采用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)柱前衍生化方法进行高效液相色谱分析测定单糖组成,红外光谱法分析官能团,利用黏度法测定多糖的粘均分子量,高碘酸氧化法分析测定多糖分子键位。结果表明,多糖DOP由D-甘露糖、L(+)-鼠李糖和D-葡萄糖三种单糖组成,通过外标法定量得知D-甘露糖：L(+)-鼠李糖：D-葡萄糖=1.936：0.856：0.691；通过红外光谱图分析,确证了多糖DOP的糖类特征,并为一种中性多糖。黏度法测定多糖DOP的粘均分子量为48.82×103。由高碘酸反应得知,多糖DOP中以1→6键相连的残基或非还原末端基(1→)占4.0%,可被高碘酸氧化,以不产生甲酸的1→2或1→4键相连的残基占52.1%,不被高碘酸氧化的1→3键连接的残基占44.9%。 对铁皮石斛多糖DOP分别测定了DPPH自由基清除率、羟基自由基清除率以及在p-胡萝卜素-亚油酸体系中的抗氧化作用,结果显示多糖DOP对DPPH自由基的清除率达到了50%以上,对羟基自由基的清除率达到了58.24%、在p-胡萝卜素-亚油酸体系中抗氧化能力值为51.05%,在三项抗氧化能力测定中,均超过了50%以上的抗氧化能力,说明铁皮石斛多糖具有较强生理活性。